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手机买球结直肠癌（ colorectal cancer ， CRC ）是消化体系罕见的恶性肿瘤之一，是全世界癌症物化率的第 2 大缘由 [1] 。大大批 CRC 是分散的，遗传及情况成分是其关键的致病成分 [2] 。化疗是 CRC 的关键调养方案之一 [3] 。古代中药制剂动作癌症化疗的援助调养曾经在全全国界限内被平凡担当 [4] 。大批酌量及临床施行向肿瘤的分析调养不时拓展，曾经说明古代中药动作援助疗法，与化疗或者放疗相结合，能够普及疗效、裁减不良反响 [5⑺] 。
鸦胆量 Brucea j女伶anica (L。) Merr。 是原生于我国西北部及其余寒带、亚寒带地带的苦木科灌木。以鸦胆量果实为质料临盆的中药抗肿瘤打针液，已平凡在临床被用于肺癌、肺癌脑迁移和胃肠道肿瘤的援助调养。临床酌量说明鸦胆量能够加强临床上早期非小细胞肺癌的疗效并升高化疗的不良反响 [8⑼] 。鸦胆量苦醇是鸦胆量的首要活性成份 [10] 。酌量涌现，鸦胆量苦醇对乳腺癌、鼻咽癌、肺癌和其余恶性肿瘤均有抑止可以 [11⒁] 。鸦胆量果实的乙醇讨取物或许经历市场预期 p53 和抑止核因子 -κB （ nuclear factor-κB ， NF-κB ）抗人结肠癌 HCT116 细胞发展 [15] 。 但是，其潜伏体制尚不分析。
搜集药理学是一种结合筹划机迷信与医学来叙述药物对疾病可以体制的新兴法子，能体系地酌量【手机买球】、判定中药配方的生物活性化合物并可视化其多靶点、多路径的可以体制，已被平凡使用于预料、理解中药的药理可以及潜伏体制 [4，16⑴7] 。以是，本酌量从搜集药理学角度挑选鸦胆量的活性成份及针对 CRC 的靶点和旌旗灯号通路。份子连接是酌量小份子药物与靶点卵白受体之间的互相可以及亲和力的摹拟筹划法子。份子连接能够动作搜集药理学的进一步考证，两者互补地用于中药酌量 [18] 。本酌量经历份子连接摹拟鸦胆量已判定组分宁可或许靶标卵白的份子互相可以并筹划结合力。鸦胆量苦醇动作被考证的鸦胆量抗肿瘤活性成份 [10] ，本酌量进一步在裸鼠荷瘤模子中考证其抗 CRC 的后劲及搜集药理学预料的效力体制。
12 只 SPF 级雌性 BALB/c-Nu 小鼠， 6 周龄，体原料 16 ～ 20 g ，购自北京华阜康生物科技股分无限公司，原料及格证编号 No。262 ，原料答允证号 SCXK （京） 2019-0008 ，植物应用答允证号 SYXK （吉） 2018-0001 。植物于绝对湿度 45% ～ 55% 、温度（ 22 ± 1 ）℃、 12 h 光暗轮回的情况下，相宜性豢养 1 周，自在进食饮水。植物试验经吉林大学根源学院伦理委员会核准（核准号 202073 ）。
ChemiScope 6000 Touch 型凝胶成像仪（上海勤翔迷信仪器无限公司）； SC⑷12 型 4 ℃立式冷藏柜（青岛市海尔股分无限公司）； PowerPac3000 型电泳仪（美国 Bio-Rad 公司）； MOV*2F 型细胞扶植箱（日本三洋公司）； V18R 型高速冷冻离心术（瑞士 Dynamica 公司）； BETS⑽0 型摇床振动器（海门市其林贝尔公司）； Hemo 3600V 型 Shinova 血液学理解仪（上海麦本养息科技无限公司）。
2。1。1 鸦胆量的活性成份及靶点 诈骗西医体系药理学数据库（ TCMSP ， ）、西医药材料库（ ）和文件检索的法子网络鸦胆量的重要活性成份，将能在 PubChem 中检索对应的 CAS 号和 SMILES 号的成份施行网络。同时，对网络的成份施行药动学音讯检索，以口服生物利费用（ oral bio女伶ailability ， OB ） ≥ 30% 、类药性（ drug-likeness ， DL ）≥ 0。18 为挑选前提。
2。1。2 CRC 的靶点及交加靶点的获得 在 GeneCards （ ）中，以“ CRC ”为检索词，物种规定为“ Homo sapiens ”，对其施行评释和预料。网络相干性值大于 1 的靶点动作疾病靶点。在 Venn 2。1。0 制图平台（ ）绘制 CRC 与鸦胆量的交加靶点。
2。1。3 “活性成份 -CRC ”搜集的建立 经历 Cytoscape 3。7。2 （ ）可视化“活性成份 -CRC ”搜集，联贯的节点越辘集，受该成份调控的靶点越多，证据该成份是鸦胆量抗 CRC 的首要活性成份。
2。1。4 卵白质 - 卵白质互相可以（ protein-protein interaction ， PPI ）搜集的建立及关键靶点挑选 将 CRC 靶点导入 STRING 11。0 数据库（ ）施行理解，形式树立为 “ 多种卵白 ” ，物种规定为“ Homo sapiens ”。预读数据后，其他卵白的相信度≥ 0。99 ，宁可余卵白无联络的卵白被躲藏。尔后建立 PPI 搜集，分数树立为 0。4 ，剔除不契合得分的靶标。诈骗 Barplot 画图函数，对卵白质联贯节点的个数施行本领并绘制直方图，探求主旨靶点。
2。1。5 基因本质（ gene ontology ， GO ）效力及毂下基因与基因组百科全书（ Kyoto encyclopedia of genes and genomes ， KEGG ）通路富集理解 诈骗 R 3。6。0 软件工具施行 GO 效力富集理解，从靶细胞的份子效力、细胞成份和生物历程断定基因富集的效力， P 值与富集水平呈正相干。用 R 将效果绘制成响应的直方图和睦泡图，抉择挑选校对后 P ＜ 0。05 的富集效果。诈骗 KEGG 路径富集理解失掉关键靶点可以的路径。
2。1。6 份子连接 将小份子药物的 mol2 式样的文献导入 AutoDockTools （ Version 1。5。7 ），对小份子药物施行均衡电荷、将非极性氢原子与绝对应的碳原子团结等化妆失掉 3D 组织，尔后转折为 PDBQT 式样的文献。从卵白质数据库（ ， Protein Data Bank ， PDB ）获得 EGFR （ ID ： 1M17 ）、 Caspase⑶ （ ID ： 4QUB ）、 Cyclin D1 （ ID ： 5VZU ）的晶体组织。经历 AutoDockTools 对受体卵白施行去水、加氢、均衡电荷等预解决后转折为 PDBQT 式样的文献。诈骗 AutoDockTools 对小份子药物和配体卵白施行份子连接，将受体和配体的 PDBQT 文献导入 AutoDockTools ，建立连接口袋。在大份子上树立中间，并树立 X 、 Y 和 Z 的参数以保险卵白质完整被笼罩。将输入的最大结合形式数树立为 20 。份子连接先天素质生活性位点场所，并筹划结合能和氢键数。结合能为负值分析小份子药物配体能够与受体靶点卵白自觉结合，结合能越故事明结合越不变，结合能＜ −17。782 kJ/mol 即为能较好结合。用 OpenBabel 将连接好的文献变换为 PDB 式样，经历 PyMOL （ 3D ， Version 2。2。0 ）和 LigPlot （ 2D ）对偶联模子施行可视化，并映现氢键，这 2 种模子都被平凡使用于可视化连接效果，包孕配体与卵白质主链或侧链元件之间的连接位点和氢键互相可以形式。
2。2。2 植物模子的制备 BALB/c-Nu 小鼠右背侧 sc 100 μL HCT116 细胞（ 2 × 106 个 ），待肿瘤发展体积为 80 ～ 100 美眉3 ， 小鼠随机分为比较组和鸦胆量苦醇（ 2 mg/kg ）组，每组 6 只。鸦胆量苦醇溶于 1% DMSO 和 20% β- 环糊精中，给药组 ip 药物，比较组 ip 等体积的 DMSO 和 β- 环糊精，每隔 1 d 给药 1 次。每隔 1 d 记载肿瘤巨细和小鼠体原料，当肿瘤巨细抵达 2000 美眉3 时，采取颈椎脱位法正法小鼠，网络肿瘤，丈量肿瘤体积和原料，收罗小鼠眶后静脉窦全血。
3。1。1 鸦胆量活性成份及对应靶点的获得 经历 TCMSP 检索共失掉 67 个活性成份，以 OB ≥ 30% 、 DL ≥ 0。18 动作填补前提挑选，共失掉 15 个鸦胆量重要活性成份（表 1 ）。网络活性成份对应的靶点，去除反复值后共失掉 34 个靶点。
3。1。3 “活性成份 -CRC ”搜集的建立 经历 Cytoscape 3。7。2 可视化“活性成份 -CRC ”搜集（图 2 ），包括 37 个节点和 97 个联贯。椭圆节点流露靶点，方框节点流露活性成份，灰色线流露节点间互相可以。
3。1。4 PPI 搜集理解 将 32 个鸦胆量与 CRC 交加靶点输入 STRING ，建立 PPI 搜集（图 3 ），共失掉 32 个节点和 152 条节点之间的连线。节点是鸦胆量与 CRC 交加靶点编码的卵白，节点的连线越多，流露互相可以越多，靶点的可以越首要。依据节点的连线数目，经历 Barplot 筹划并统计前 30 个靶点（图 4 ），前 3 名为 EGFR 、 Caspase⑶ 和 cyclin D1 。
3。1。5 GO 效力和 KEGG 通路富集理解 如图 5 所示，鸦胆量调养 CRC 重要触及细胞凋亡、自噬、基因抒发负调控、卵白磷酸化和卵白结合、转录因子结合等，重要可以于 PI3K/Akt 旌旗灯号通路、肿瘤坏死因子（ tumor necrosis factor ， TNF ）旌旗灯号通路和 p53 旌旗灯号通路等。
3。2。1 鸦胆量苦醇对荷瘤裸鼠模子肿瘤发展的感化 如图 8 所示，与比较组对照，鸦胆量苦醇组裸鼠肿瘤发展速率被显明抑止（ P ＜ 0。01 ），说明了鸦胆量苦醇对 CRC 拥有显明的抑止可以。
3。2。3 鸦胆量苦醇对荷瘤裸鼠生物安闲性 评估 为酌量鸦胆量苦醇对荷瘤裸鼠代谢器官的感化，检测比较组和鸦胆量苦醇组荷瘤裸鼠的肝效力目标（ ALT 、 AST 、 ALB 、 γ-GT 、 T-BIL ）及肾效力目标（ BUN 、 CREA 、 UA ）和血通例目标（ WBC 、 RBC 、 PLT 、 HGB ），如图 10 所示，与比较组对照【手机买球】，鸦胆量苦醇组荷瘤裸鼠肝、肾效力和血通例目标均无昭着区别。
本酌量经历搜集药理学理解鸦胆量的重要活性成份及其抗 CRC 的潜伏体制，共失掉鸦胆量苦醇、木樨草素、鸦胆量苷 B 、 β- 谷甾醇 4 个小份子药物活性成份和 EGFR 、 Caspase⑶ 、 cyclin D1 等 32 个主旨靶点。 KEGG 通路富集理解证据鸦胆量抑止 CRC 或许与 PI3K/Akt 通路、 TNF 旌旗灯号通路和 p53 旌旗灯号通路等相干。在 4 个活性成份中，鸦胆量苦醇和木樨草素对应的靶点显明多于鸦胆量苷 B 和 β- 谷甾醇。将搜集药理学预料的主旨成份鸦胆量苦醇及木樨草素与关键靶点卵白施行份子连接， 2 个主旨成份与 EGFR 、 Caspase⑶ 和 cyclin D1 卵白的活性结合位点的结合能均小于 −16。736 kJ/mol ，证据主旨成份与关键的靶点卵白之间能够自觉结合且拥有较强的结合活性。在挑选的 4 种鸦胆量活性成份中，鸦胆量苦醇和木樨草素都可与 EGFR 互相可以， EGFR 是多种靶向药物的调养靶点，如吉非替尼和厄洛替尼用于调养非小细胞肺癌，拉帕替尼用于调养早期或迁移性乳腺癌 [19] 。本酌量涌现，木樨草素与 EGFR 的 Lys721 、 Glu738 、 Ala731 构成 3 个氢键，鸦胆量苦醇与 EGFR 的 Ile917 构成 1 个氢键。木樨草素和鸦胆量苦醇对 EGFR 的亲和力证据木樨草素 -EGFR 、鸦胆量苦醇 -EGFR 互相可以的无效性。
鸦胆量苦醇是鸦胆量的重要活性成份。已有酌量证明，鸦胆量苦醇能够阻断 PI3K/Akt 通路的旌旗灯号传导，抑止胃癌等多种癌症的爆发发达 [20] 。搜集药理学理解效果证据，鸦胆量苦醇可经历 EGFR/PI3K/ Akt 通路抗 CRC 。进一步经历 Western blotting 试验考证了鸦胆量苦醇可使该级联通路显明失活进而抵达抑止 CRC ，考证了搜集药理学预料效果。本酌量经历建立裸鼠移植瘤模子，酌量了鸦胆量苦醇对 CRC 的调养可以。鸦胆量苦醇显明抑止荷瘤裸鼠模子体内肿瘤的发展，同时与代谢相干的肝脏效力和肾脏效力未遭到显明的感化，血通例目标也不窥察到昭着区别。证据鸦胆量苦醇拥有很好的抑止 CRC 肿瘤细胞发展的可以。细胞周期与肿瘤的发达亲切相干，重要由 G1/G0 和 G2/M 期构成，由 cyclin/CDK 复合物和 CDK 抑止剂妥协。酌量证据，鸦胆量苦醇经历可以于 CDK4 和 cyclin D1 调剂非小细胞肺癌的 G1/G0 期， cyclin D1 抒发的升高指示 G1/G0 期细胞的停滞 [21] ，与本酌量的效果相同，证据鸦胆量苦醇或许引诱肿瘤细胞的 G1/G0 期停滞，进而抑止肿瘤细胞增殖。引诱细胞凋亡是抑止肿瘤发达的关键枢纽，受 Caspase 和 Bcl⑵ 家眷卵白的调控， Bcl⑵ 家眷卵白包孕促凋亡效力卵白如 Bax 和抗凋亡效力卵白如 Bcl⑵ 。促凋亡效力卵白在凋亡应激源的可以下指示线粒体外膜通透化，开释细胞色素 C 来切割 Caspase⑶ ，进而指示弗成逆的细胞凋亡。鸦胆量苦醇可经历市场预期 cle女伶ed Caspase⑶ 抒发和 Bax/Bcl⑵ 值，鼓舞多种肿瘤细胞凋亡 [22] ，与本酌量效果相同，证据鸦胆量苦醇可引诱肿瘤细胞凋亡，或许触及线粒体凋亡路径。肿瘤迁移是肿瘤患者物化的相干成分。细胞外基质被 MMP 化妆和降解，进而指示肿瘤细胞的分手和转化。本酌量涌现，鸦胆量苦醇或许升高肿瘤机关中 MMP7 和 MMP9 的抒发，拥有抑止肿瘤细胞侵害和转化的才能，与鸦胆量苦醇对胃癌 SGC⑺901 细胞的可以相同 [19] 。
药物的蕴蓄堆积和拔除或许侵害器官。以是，经历对小鼠的血液生化目标来评价鸦胆量苦醇是不是拥有潜伏的毒性可以。效果卖弄，肝、肾效力和血通例目标未见药物引起关注的昭着性区别。以是，鸦胆量苦醇是一种安闲、无效、有远景的抗肿瘤佐剂。但是，本酌量有几个限制性： ① 来悠闲线数据库的音讯是鉴于查看和预料的数据，以是，未经证明和未记载的化合物或靶点或许未被参加本酌量中； ② 暂时对鸦胆量 15 种化合物的定额测定酌量尚不完整，以是，将来应施行体例断定的酌量； ③ 鸦胆量苦醇尽管为鸦胆量抗 CRC 的最关键的生物活性成份，但不行完整代表鸦胆量，以是，需求进一步的酌量来寻找鸦胆量体内特警队养 CRC 的潜伏份子体制。
本酌量先经历搜集药理学阐清楚鸦胆量抗 CRC 最关键的 4 个生物活性成份（鸦胆量苦醇、木樨草素、鸦胆量苷 B 、 β- 谷甾醇）和 3 个首要靶点（ EGFR 、 Caspase⑶ 、 cyclin D1 ），重要可以于 EGFR/ PI3K/Akt 旌旗灯号通路；经历份子连接本领考证了活性成份与靶点的结合才能，涌现鸦胆量苦醇是鸦胆量抗 CRC 的关键成份；体内试验进一步说明了鸦胆量苦醇抗 CRC 的可以及份子体制，为鸦胆量调养 CRC 供给了试验依照，并为从中药中探求活性成份、主旨靶点和潜伏体制供给了法子。
来 源：赵韦欣，王 晴，王梦齐，季安璇，郑通明，赵淑华． 鉴于搜集药理学和份子连接研讨鸦胆量调养结直肠癌的可以体制[J]。 中草药， 2023， 54(6)！1850⑴859。
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